Repoussez les limites de la détection des EVs — Go Deeper !
Les vésicules extracellulaires (EVs) sont des acteurs essentiels de la communication intercellulaire, jouant un rôle majeur dans les réponses immunitaires, la régénération tissulaire, la croissance tumorale, et bien plus encore. Leur analyse reste toutefois complexe, en raison des limites de la cytométrie traditionnelle pour détecter les EVs de moins de 100 nm.
Avec le CytoFLEX Nano, abaissez les seuils de détection et allez plus loin.
Une nouvelle approche de la cytométrie en flux à l’échelle nanométrique
Le Beckman Coulter CytoFLEX Nano
La cytométrie en flux à l’échelle nanométrique est une technologie de pointe qui associe les principes de la cytométrie en flux à la nanotechnologie. Elle permet d’analyser des particules nanométriques et de fournir des informations détaillées sur leur taille, leur composition et leurs propriétés de surface.
Cette approche trouve des applications dans de nombreux domaines, notamment la biologie, la médecine et les sciences des matériaux. Elle offre la possibilité de caractériser des nanoparticules, des vésicules extracellulaires et d’autres particules de très petite taille avec une grande précision.
La cytométrie nanométrique ouvre également des perspectives prometteuses pour le développement d’outils diagnostiques et de systèmes d’administration ciblée de médicaments. La capacité d’analyser des nanoparticules selon leurs caractéristiques ouvre la voie à de nouvelles avancées en médecine personnalisée et en nanomédecine.
Détectez des nanoparticules jusqu’à 40 nm — Avec détection multiparamétrique
Le CytoFLEX Nano est le premier cytomètre en flux dédié à l’échelle nanométrique capable de détecter des nanoparticules — comme les vésicules extracellulaires (EVs) — jusqu’à 40 nm, tout en assurant une détection fluorescente multiparamétrique.
Son interface logicielle, CytExpert Nano, offre la puissance nécessaire pour explorer la gamme nanométrique tout en conservant la simplicité d’utilisation propre à la plateforme CytoFLEX. Ainsi, répondre à des questions de recherche complexes devient plus accessible que jamais pour les chercheurs travaillant sur les EVs.
Qu’est-ce qui rend le CytoFLEX Nano unique ?
Conçu sur les mêmes fondations que la plateforme CytoFLEX, le CytoFLEX Nano combine les capacités de plusieurs méthodes au sein d’un seul instrument. Il permet :
- La détection de nanoparticules jusqu’à 40 nm
- L’analyse de marqueurs individuels d’EV, même à faible expression (<10 copies d’antigènes)
- Une analyse standardisée, rapide et précise, sans recourir à plusieurs systèmes
Source : Beckman Coulter
Figure 1. Taille comparative de différentes cellules et vésicules extracellulaires.
Le cytomètre en flux CytoFLEX Nano peut détecter, caractériser et déterminer la taille de vésicules extracellulaires jusqu’à 40 nm.
Principaux avantages et caractéristiques
Sensibilité et détection multicanale
- Six canaux de fluorescence et cinq canaux de diffusion latérale permettent une analyse détaillée des particules les plus petites.
- Une puissance laser renforcée et des chemins optiques d’excitation spécifiquement conçus captent davantage de lumière, améliorant l’efficacité analytique.
Pureté des données et réduction de la contamination
- Des outils de nettoyage automatisés détectent et éliminent rapidement les contaminations, limitant les pertes d’échantillons à <1 %.
- Le contrôle qualité quotidien détecte le bruit généré par les nano- et microbulles et déclenche automatiquement les cycles de purge et de nettoyage.
Systèmes optiques et fluidiques optimisés
- La réduction des débits d’échantillons et de liquide gain permet de travailler avec des micro-échantillons tout en assurant une grande précision.
- Une pompe à piston de petit volume garantit une stabilité et une précision de comptage supérieures (>90 %).
- Un liquide gain spécialisé associé à un filtre variable de 5 nm réduit le bruit de fond.
Simplicité d’utilisation
- Le logiciel intuitif CytExpert facilite la configuration du système et s’adapte aux besoins des utilisateurs, quel que soit leur niveau.
- L’automatisation des processus réduit le temps nécessaire et simplifie la préparation des échantillons.
La puissance du CytoFLEX Nano — Comptez, caractérisez et déterminez la taille avec un seul instrument
Le CytoFLEX Nano regroupe toutes les capacités essentielles d’analyse à l’échelle nanométrique dans un instrument unique, permettant le comptage, la caractérisation et la détermination de taille.
Détermination de taille
La détermination de la taille des particules en cytométrie en flux nécessite une calibration réalisée avec une particule de référence bien caractérisée et une méthode de calibration adaptée.
Les particules de polystyrène latex sont privilégiées, car elles sont traçables NIST et présentent une fabrication très homogène.
Grâce à la méthode de calibration enseignée à chaque utilisateur du CytoFLEX Nano, les données de taille peuvent être reportées en unités absolues, facilitant la comparaison et la corrélation entre méthodes.
Comptage
Les méthodes de comptage les plus robustes reposent sur une distribution volumétrique strictement contrôlée plutôt que sur un chargement manuel, source de variabilité.
Le CytoFLEX Nano permet d’adapter précisément la gestion d’échantillon afin d’utiliser le volume idéal pour atteindre les résultats attendus.
Caractérisation
La caractérisation de particules nanométriques exige une sensibilité optimale.
Pour cela, le CytoFLEX Nano intègre un système optique et fluidique entièrement repensé afin de maximiser la détection des signaux fluorescents les plus faibles, via six canaux de détection excités par quatre lasers colinéaires.
Obtenez une vision complète de vos expériences EV avec le cytomètre en flux CytoFLEX Nano
Ce cytomètre en flux dédié offre une sensibilité accrue, des performances instrumentales constantes et la flexibilité nécessaire pour étudier vos échantillons en toute confiance.
Sensibilité
Grâce à une sensibilité exceptionnelle allant de 1 µm à 40 nm* et une résolution de 10 nm**, le CytoFLEX Nano permet de détecter les populations d’EV les plus petites ainsi que leurs cargos faiblement exprimés.
Flexibilité
Ouvrez votre champ d’étude avec 6 canaux fluorescents et 5 canaux de diffusion latérale. Collectez toutes les données nécessaires avec moins de contraintes.
Répétabilité maximale
Travailler sur des particules nanométriques nécessite des performances instrumentales robustes et sans contamination.
Obtenez des résultats reproductibles grâce à une précision de comptage volumétrique >90 % et un carryover <1 %, soutenus par des contrôles qualité automatisés.
Familiarity
Conçu sur les mêmes principes que la plateforme CytoFLEX, le CytoFLEX Nano conserve un format similaire et une interface logicielle intuitive pour une expérience d’utilisation fluide.
Envie de faire progresser vos recherches sur les vésicules extracellulaires ?
Découvrez comment le cytomètre en flux CytoFLEX Nano de Beckman Coulter dépasse les limites de détection précédentes et offre aux chercheurs des données qui étaient auparavant inaccessibles.
Trois facteurs essentiels à considérer lors du choix d’un cytomètre en flux
Compter, mesurer et caractériser les vésicules extracellulaires (EVs) permet aux chercheurs d’obtenir des informations plus approfondies sur l’état de santé des cellules, des tissus et des organes, ainsi que sur les profils pathologiques. Toutefois, l’analyse des EVs reste complexe en raison de leur petite taille et de leur hétérogénéité.
Le besoin de standardisation
Jusqu’à présent, les scientifiques devaient utiliser plusieurs techniques pour compter, caractériser et déterminer la taille des EVs avec précision. Cela conduit souvent à des workflows longs, exigeants et difficiles à reproduire, limitant la cohérence des résultats.
Webinar : Premières expériences avec le CytoFLEX Nano
Ce webinar met en avant Alfonso Blanco, Director of Flow à l’University College Dublin, qui présente les premiers résultats obtenus par des chercheurs travaillant sur les vésicules extracellulaires (EVs) grâce au cytomètre en flux CytoFLEX Nano.
La session explore les limites des technologies actuelles de cytométrie en flux et montre comment le CytoFLEX Nano a été conçu pour répondre à ces défis via un système robuste et cohérent, capable de standardiser les résultats entre laboratoires.
Notre expert, Alfonso Blanco, explique les avantages de l’utilisation de la fluorescence combinée à plusieurs paramètres de diffusion pour une caractérisation plus approfondie des nanoparticules et des vésicules extracellulaires.
Revue de presse : Ce qu’ils disent des avancées récentes en recherche sur les vésicules extracellulaires
Dans l’article « Developments in Extracellular Vesicle (EV) Research Present a Promising Future », publié dans Technology Network en juillet 2024, Matthew Goff, Product Manager chez Beckman Coulter, aborde plusieurs thématiques clés :
- Les défis traditionnels de la recherche sur les EV
- L’émergence de nouvelles technologies
- L’importance de l’automatisation des workflows
- Le rôle des technologies nanométriques dans l’accélération de la recherche sur les EV
« …Grâce à une meilleure clarté des résultats, les EV ouvrent la voie à des applications diagnostiques, pronostiques, théranostiques et thérapeutiques avancées, tout en réduisant le caractère invasif de la collecte d’échantillons. Suivre l’évolution d’une maladie ou développer des modèles thérapeutiques personnalisés est incroyablement puissant, mais cela exige une grande spécificité analytique. Cette spécificité est désormais accessible à un large éventail de chercheurs.
Mettre à jour ce workflow représente un moment particulièrement enthousiasmant pour la recherche… »
Beckman Coulter Life Sciences révolutionne l’analyse des nanoparticules avec le lancement du CytoFLEX Nano Flow Cytometer
Article publié dans Technology Network — 28 mars 2024
« …Le CytoFLEX Nano Flow Cytometer repousse les limites précédentes des capacités de détection, offrant aux chercheurs des données auxquelles ils n’auraient jamais pu accéder auparavant. Cela ouvre de nouvelles perspectives et peut permettre des découvertes majeures dans la lutte contre de nombreuses maladies.
Les vésicules extracellulaires sont présentes partout, et les chercheurs disposent enfin d’un outil capable de révéler ce qui se trouvait sous leurs yeux depuis le début.
Nous avons écouté les besoins de nos clients pour créer un carrefour analytique en augmentant la sensibilité grâce à l’amélioration de la fluidique, de l’optique et de l’électronique… »
Comprendre les vésicules extracellulaires (EVs)
Les vésicules extracellulaires (EVs) sont de petites particules délimitées par une membrane, libérées par les cellules dans leur environnement. Elles jouent un rôle essentiel dans la communication intercellulaire et interviennent dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques. Les EVs sont classées selon leur biogenèse et leur taille en exosomes, microvésicules et corps apoptotiques.
Exosomes (petites EVs)
Les exosomes mesurent généralement 30 à 150 nm. Ils proviennent du bourgeonnement interne des corps multivésiculaires (MVBs), qui fusionnent ensuite avec la membrane plasmique pour libérer leur contenu. Ils transportent des molécules bioactives—protéines, lipides, acides nucléiques (ADN, ARN) et microARN—capables de modifier la fonction des cellules cibles.
Microvésicules (grandes EVs)
Les microvésicules, également appelées grandes EVs, microparticules ou ectosomes, mesurent 100 à 1000 nm. Elles sont produites par bourgeonnement et détachement direct de la membrane plasmique. Leur cargaison variée peut influencer de nombreux types cellulaires.
Corps apoptotiques
Les corps apoptotiques, les plus grands EVs, mesurent 1 à 5 µm. Ils sont générés lors de l’apoptose et contiennent des fragments cellulaires, des organites et du matériel nucléaire, ensuite éliminés par les cellules phagocytaires.
Un domaine de recherche en pleine expansion
Les EVs sont devenues un sujet central en raison de leur potentiel en biomarqueurs, de leur rôle dans la communication cellulaire et de leurs applications thérapeutiques. Leur analyse dans des fluides biologiques tels que le sang, l’urine ou le liquide céphalorachidien apporte des informations clés sur leurs fonctions et leur contenu.
Des technologies avancées—nanocymétrie en flux, microscopie électronique, séquençage ARN, protéomique—sont indispensables pour les caractériser. Ce domaine promet des avancées majeures en diagnostic, thérapie et médecine régénérative.
Les défis actuels de l’analyse des EVs
Malgré leur importance, les EVs présentent de nombreuses difficultés analytiques :
- Les méthodes d’isolement et de purification peuvent entraîner faible rendement, contamination et manque de standardisation.
- Les EVs sont très hétérogènes en taille, composition et biogenèse.
- Leurs fonctions variées compliquent l’interprétation mécanistique.
- Leur hétérogénéité fonctionnelle nécessite des workflows de caractérisation plus complets et des tests standardisés.
L’une des principales limitations reste la nécessité d’utiliser plusieurs techniques pour compter, caractériser et mesurer la taille des EVs, entraînant des workflows longs, complexes et peu reproductibles.