Doorbreek de grenzen van EV-detectie — Go Deeper!
Extracellulaire vesikels (EV’s) zijn cruciale spelers in intercellulaire communicatie en hebben een belangrijke rol in immuunresponsen, weefselregeneratie, tumorgroei en meer. De analyse ervan blijft echter uitdagend vanwege de beperkingen van traditionele cytometrie bij het detecteren van EV’s kleiner dan 100 nm.
Met de CytoFLEX Nano verlegt u de detectiegrenzen en bereikt u meer.
Een nieuwe benadering van nanoschaal-flowcytometrie
De Beckman Coulter CytoFLEX Nano
Nanoschaal-flowcytometrie is een geavanceerde techniek die de principes van flowcytometrie combineert met nanotechnologie. Ze maakt een gedetailleerde analyse mogelijk van nanodeeltjes en levert informatie over hun grootte, samenstelling en oppervlakte-eigenschappen.
Deze technologie heeft toepassingen in verschillende domeinen, waaronder biologie, geneeskunde en materiaalkunde. Ze laat onderzoekers toe nanopartikels, extracellulaire vesikels en andere kleine deeltjes met hoge precisie en gevoeligheid te karakteriseren.
Daarnaast biedt nanoschaal-flowcytometrie veel potentieel voor de ontwikkeling van diagnostische hulpmiddelen en gerichte toedieningssystemen. Het vermogen om nanopartikels te analyseren op basis van hun eigenschappen opent nieuwe mogelijkheden voor gepersonaliseerde geneeskunde en nanogeneeskunde.
Detecteer nanodeeltjes tot 40 nm — Met multiparameter fluorescentiedetectie
De CytoFLEX Nano is de eerste speciaal ontworpen nanoschaal-flowcytometer die nanodeeltjes, zoals extracellulaire vesikels (EV’s), kan detecteren tot 40 nm, terwijl hij gelijktijdig multiparameter fluorescentiedetectie uitvoert.
De software-interface, CytExpert Nano, biedt de geavanceerde mogelijkheden die nodig zijn om de nanoschaal te verkennen, maar behoudt tegelijk het gebruiksgemak van het CytoFLEX-platform. Hierdoor wordt het voor EV-onderzoekers eenvoudiger dan ooit om antwoorden te vinden op complexe onderzoeksvragen.
Wat maakt de CytoFLEX Nano uniek?
Gebouwd op dezelfde principes als het CytoFLEX-platform, combineert de CytoFLEX Nano de mogelijkheden van verschillende methoden in één enkel systeem. Het toestel maakt het mogelijk om:
- Nanodeeltjes te detecteren tot 40 nm
- Individuele EV-markers te analyseren, zelfs bij lage expressie (<10 antigeenkopieën)
- Gestandaardiseerde, snelle en nauwkeurige analyses uit te voeren zonder meerdere apparaten
Bron: Beckman Coulter
Figuur 1. Groottevergelijking van verschillende cellen en extracellulaire vesikels.
De CytoFLEX Nano Flowcytometer kan extracellulaire vesikels detecteren, karakteriseren en meten tot 40 nm.
Belangrijkste Voordelen en Kenmerken
Gevoeligheid en multikanaaldetectie
- Zes fluorescentiekanalen en vijf sidescatterkanalen maken gedetailleerde analyse mogelijk, zelfs van de kleinste deeltjes.
- Verhoogd laservermogen en speciaal ontworpen optische excitatiepaden verzamelen meer licht en verbeteren zo de analyseefficiëntie.
Datapuurheid en minimale contaminatie
- Geautomatiseerde reinigingstools detecteren en verwijderen snel contaminatie, waardoor monsterverlies beperkt blijft tot <1%.
- De dagelijkse kwaliteitscontrole detecteert ruis afkomstig van nano- en microbellen en activeert automatisch purge- en reinigingscycli.
Geoptimaliseerde optische en vloeistofsystemen
- Lagere debieten voor monsters en sheath-vloeistof maken werken met microsamples mogelijk met behoud van hoge nauwkeurigheid.
- Een kleine zuigerpomp zorgt voor stabiele en nauwkeurige tellingen (>90%).
- Gespecialiseerde sheath-vloeistof in combinatie met een variabel 5 nm-filter minimaliseert achtergrondruis.
Gebruiksgemak
- De intuïtieve CytExpert-software vereenvoudigt de systeemconfiguratie en past zich gemakkelijk aan gebruikers van elk niveau aan.
- Procesautomatisering verkort de verwerkingstijd en vereenvoudigt de monsterpreparatie.
De kracht van de CytoFLEX Nano — Tellen, karakteriseren en grootte bepalen met één instrument
De CytoFLEX Nano combineert alle essentiële analysemogelijkheden op nanoschaal in één enkel systeem, waardoor tellen, karakteriseren en groottebepaling mogelijk worden.
Groottebepaling
Een nauwkeurige groottebepaling via flowcytometrie vereist een kalibratie met een goed gekarakteriseerde referentiedeeltje en een geschikte kalibratiemethode.
Latexpolystyreen-deeltjes zijn hierbij de voorkeursoplossing dankzij hun NIST-traceerbaarheid en consistente productie.
Met de kalibratiemethode die elke CytoFLEX Nano-gebruiker ontvangt, kunnen groottegegevens betrouwbaar in absolute eenheden worden gerapporteerd, wat methodevergelijking en correlatie mogelijk maakt.
Tellen
De meest robuuste telmethoden steunen op een nauwkeurig gecontroleerde volumetrische monsteraanvoer, in plaats van handmatig laden, dat variabiliteit introduceert.
De CytoFLEX Nano biedt gebruikers flexibiliteit om de monstervoorziening aan te passen zodat precies het juiste volume wordt gebruikt.
Karakteriseren
Het karakteriseren van de kleinste deeltjes vereist topklasse gevoeligheid.
Daarom beschikt de CytoFLEX Nano over een volledig opnieuw ontworpen optisch en vloeistofsysteem dat de detectie van zelfs minimale fluorescentiesignalen maximaliseert, via zes detectiekanalen aangedreven door vier collineaire lasers.
Krijg het volledige beeld van uw EV-experiment met de CytoFLEX Nano Flowcytometer
Deze speciaal ontwikkelde flowcytometer biedt hogere gevoeligheid, consistente prestaties en de flexibiliteit om uw monsters met vertrouwen te analyseren.
Gevoeligheid
Met een ongeëvenaarde groottegevoeligheid van 1 µm tot 40 nm* en een resolutie van 10 nm** maakt de CytoFLEX Nano de detectie mogelijk van kleinere EV-populaties en hun laag-abundante inhoud.
Flexibiliteit
Breid uw onderzoeksruimte uit met 6 fluorescentiekanalen en 5 sidescatterkanalen. Verzamel alle noodzakelijke gegevens met minder beperkingen.
Maximale consistentie
Bij het werken met de kleinste deeltjes is contaminatievrije, robuuste instrumentprestatie essentieel.
Vertrouw op reproduceerbare resultaten dankzij >90% volumetrische telprecisie en <1% carryover, ondersteund door geautomatiseerde QC-controles.
Bekendheid
Gebouwd op dezelfde principes als het CytoFLEX-platform, behoudt de CytoFLEX Nano een vergelijkbare footprint en een gebruiksvriendelijke software-interface voor een naadloze gebruikerservaring.
Wilt u uw onderzoek naar extracellulaire vesikels naar een hoger niveau tillen?
Ontdek hoe de Beckman Coulter CytoFLEX Nano Flowcytometer de vroegere detectielimieten doorbreekt en onderzoekers toegang geeft tot gegevens die tot nu toe onbereikbaar waren.
Drie belangrijke factoren bij het kiezen van een flowcytometer
Het tellen, meten en karakteriseren van extracellulaire vesikels (EV’s) geeft onderzoekers diepere inzichten in de gezondheid van cellen en organen en in ziekteprofielen. EV’s zijn echter moeilijk te analyseren vanwege hun kleine formaat en heterogeniteit.
De nood aan standaardisatie
Tot nu toe moesten onderzoekers meerdere technieken combineren om EV’s nauwkeurig te tellen, karakteriseren en in grootte te bepalen. Dit leidt vaak tot tijdrovende workflows met een beperkte reproduceerbaarheid, wat de consistentie van de resultaten bemoeilijkt.
Webinar: Eerste ervaringen met de CytoFLEX Nano
In dit webinar presenteert Alfonso Blanco, Director of Flow aan University College Dublin, de eerste resultaten die onderzoekers in het domein van extracellulaire vesikels (EV’s) hebben verkregen met de CytoFLEX Nano Flowcytometer.
De sessie onderzoekt de beperkingen van bestaande flowcytometrietechnologieën en laat zien hoe de CytoFLEX Nano ontworpen is om deze uitdagingen aan te pakken via een robuust en consistent systeem dat resultaten tussen laboratoria kan standaardiseren.
Onze expert, Alfonso Blanco, bespreekt de voordelen van het combineren van fluorescentie met meerdere scatterkanalen voor een diepere karakterisering van nanopartikels en extracellulaire vesikels.
Persoverzicht: Wat men zegt over recente inzichten in extracellulaire vesikelonderzoek
In het artikel “Developments in Extracellular Vesicle (EV) Research Present a Promising Future”, gepubliceerd in Technology Network (juli 2024), bespreekt Matthew Goff, Product Manager bij Beckman Coulter, verschillende belangrijke thema’s:
- Traditionele uitdagingen in EV-onderzoek
- Opkomst van nieuwe technologieën
- Het belang van workflowautomatisatie
- Hoe nanotechnologie het onderzoek naar elektrische voertuigen versnelt
“...Dankzij de grotere duidelijkheid in de resultaten maken EV’s geavanceerde diagnostische, prognostische, theranostische en therapeutische toepassingen mogelijk, terwijl de invasiviteit van de monsterafname wordt verminderd. Het volgen van het ziekteverloop of het ontwikkelen van op maat gemaakte therapeutische modellen is ongelooflijk krachtig, maar vereist zeer specifieke analysemethoden. Dit niveau van specificiteit is nu eindelijk beschikbaar voor een breed scala aan onderzoekers.
“Het bijwerken van deze workflow is echt een spannend moment in het onderzoek...”
Beckman Coulter Life Sciences vernieuwt de analyse van nanodeeltjes met de lancering van de CytoFLEX Nano Flowcytometer
Artikel gepubliceerd in Technology Network — 28 maart 2024
“...De CytoFLEX Nano Flowcytometer doorbreekt de eerdere grenzen van detectiecapaciteiten en geeft onderzoekers toegang tot gegevens die voorheen onbereikbaar waren. Dit opent nieuwe mogelijkheden en kan baanbrekende ontdekkingen mogelijk maken in de strijd tegen talloze ziekten.
Extracellulaire vesikels komen overal voor, en onderzoekers hebben nu eindelijk een instrument om te zien wat altijd al voor hen lag.
We hebben geluisterd naar de behoeften van onze klanten en een analytisch kruispunt gecreëerd door de gevoeligheid te verhogen via verbeterde fluidica, optiek en elektronica...”
Begrip van extracellulaire vesikels (EV’s)
Extracellulaire vesikels (EV’s) zijn kleine, membraangebonden deeltjes die door cellen in de extracellulaire omgeving worden vrijgegeven. Ze spelen een cruciale rol in celcommunicatie en nemen deel aan uiteenlopende fysiologische en pathologische processen. EV’s worden ingedeeld op basis van hun biogenese en grootte in exosomen, microvesikels en apoptotische lichaampjes.
Exosomen (kleine EV’s)
Exosomen zijn doorgaans 30–150 nm groot. Ze ontstaan door naar binnen gerichte budding van multivesiculaire lichamen (MVB’s), die vervolgens met het plasmamembraan fuseren. Ze vervoeren bioactieve moleculen—eiwitten, lipiden, nucleïnezuren (DNA, RNA) en microRNA’s—die de functie van doelcellen kunnen beïnvloeden.
Microvesikels (grote EV’s)
Microvesikels, ook grote EV’s, micropartikels of ectosomen genoemd, variëren van 100 tot 1000 nm. Ze worden gevormd door naar buiten gerichte budding van het plasmamembraan en bevatten diverse biomoleculen die kunnen worden overgedragen naar ontvangende cellen.
Apoptotische lichaampjes
Apoptotische lichaampjes zijn de grootste EV’s ( 1–5 µm ), gevormd tijdens geprogrammeerde celdood. Ze bevatten cellulaire fragmenten, organellen en nucleair materiaal en worden door fagocyten opgeruimd.
Een onderzoeksdomein met groot potentieel
EV’s trekken steeds meer aandacht vanwege hun rol als biomarkers, hun betrokkenheid bij celcommunicatie en hun therapeutische mogelijkheden. Onderzoekers bestuderen EV’s in biologische vloeistoffen zoals bloed, urine en hersenvocht om inzicht te krijgen in hun functies en lading.
Geavanceerde technieken—nano-flowcytometrie, elektronenmicroscopie, RNA-sequencing, proteomics—zijn essentieel voor karakterisatie en analyse. Dit onderzoek opent veelbelovende perspectieven voor diagnostiek, therapieën en regeneratieve geneeskunde.
Huidige uitdagingen in EV-analyse
De analyse van EV’s blijft complex vanwege:
- Lage opbrengst en mogelijke contaminatie tijdens isolatie en zuivering
- Grote heterogeniteit in grootte, lading en biogenese
- Grote variabiliteit in biologische functies afhankelijk van herkomst
- Noodzaak van verbeterde functionele karakterisatie en gestandaardiseerde assays
Een van de grootste beperkingen blijft het gebruik van meerdere technieken om EV’s betrouwbaar te tellen, karakteriseren en in grootte te bepalen. Dit leidt tot tijdrovende en slecht reproduceerbare workflows.