Acoerela: innovatieve optische probes en referentiestandaarden voor EV’s, nanodeeltjes, bacteriën en tumoronderzoek
Traditionele probes voor extracellulaire vesikels (EV’s) genereren vaak niet-specifieke signalen, wat de interpretatie van gegevens bemoeilijkt.
Acoerela-probes verhelpen dit probleem door echte biologische signalen duidelijk te onderscheiden van achtergrondruis. De Reference Liposomes ondersteunen bovendien de instrumentoptimalisatie en assay-standaardisatie, wat betrouwbare en reproduceerbare resultaten mogelijk maakt.
Deze wateroplosbare membraankleurstoffen zorgen voor een zeer specifieke en stabiele kleuring van celmembranen met een minimaal achtergrondsignaal. Ze zijn geschikt voor een breed gamma aan toepassingen in imaging en flowcytometrie.
Bekijk in deze korte video van één minuut het volledige aanbod geavanceerde kleurstoffen van Acoerela.
’s Werelds eerste volledig bilayer-overspannende lipofiele kleurstoffen
Wateroplosbare Acoerela-kleurstoffen
Veel traditionele kleurstoffen zijn sterk hydrofoob en moeten worden opgelost in organische oplosmiddelen zoals DMSO of ethanol. Deze oplosmiddelen kunnen echter artefacten veroorzaken in biologische stalen, omdat ze minder biocompatibel zijn dan waterige buffers.
Daarnaast hebben sommige kleurstoffen — zoals carbocyaninekleurstoffen — de neiging om nanoaggregaten te vormen wanneer ze seriële verdunningen ondergaan vanuit DMSO- of ethanolstockoplossingen. Deze nanoaggregaten kunnen leiden tot fout-positieve signalen, vooral bij de analyse van kleine biologische deeltjes zoals exosomen.
Waarom kiezen voor Acoerela
Fluorogeen gedrag
Acoerela-kleurstoffen hebben een hoog kwantumrendement (>25%). De sterke toename in fluorescentie treedt uitsluitend op wanneer de kleurstof aan haar doelwit bindt, veroorzaakt door veranderingen in de lokale hydrofobiciteit. Het duidelijke verschil tussen gebonden en ongebonden emissieprofielen vormt de basis van het “light-on”-mechanisme.
Diverse kleurmogelijkheden
Het chromofoorplatform van Acoerela ondersteunt momenteel tot drie verschillende kleuren. De ontwikkeling van bredere excitatie- en emissieprofielen is aan de gang, wat extra multiplexing-mogelijkheden biedt voor uiteenlopende toepassingen.
Wateroplosbaarheid
Acoerela-kleurstoffen zijn sterk wateroplosbaar en vormen geen micellen of nanodeeltjes wanneer ze worden opgelost in een waterige buffer. Hiermee vermijden ze fout-positieve signalen zoals die kunnen optreden met PKH26-, DiR- en DiD-kleurstoffen bij flowcytometrische analyse van exosomen.
>95 % nauwkeurigheid
Veel gebruikte kleurstoffen hebben fout-positiviteitspercentages van meer dan 70 %, terwijl Acoerela-kleurstoffen een nauwkeurigheid van >95 % bereiken.
Snel: 1 uur
Conventionele kleurstoffen kunnen meer dan acht uur nodig hebben om resultaten te leveren. Acoerela-kleurstoffen geven betrouwbare gegevens binnen ongeveer één uur.
Eenvoudig: 1 stap
De meeste klassieke kleurstoffen vereisen meerdere verwerkingsstappen. Acoerela-kleurstoffen vereenvoudigen dit proces met een gebruiksvriendelijk éénstapsprotocol.
Extracellulaire-vesikelkleurstoffen: wateroplosbare kleurstoffen voor het labelen van nanometer-grote vesikels en exosomen
De sterk wateroplosbare Acoerela-kleurstoffen voor extracellulaire vesikels maken een nauwkeurige detectie mogelijk van nanogrote extracellulaire vesikels, exosomen en liposomen, zonder artefacten of fout-positieve signalen afkomstig van de kleurstof zelf. Deze betrouwbaarheid komt voort uit de gepatenteerde chemie van Acoerela, die voorkomt dat de kleurstof micellen of nanodeeltjes vormt.
Acoerela-kleurstoffen zijn oplosbaar in waterige buffers (zoals water, PBS en fysiologische zoutoplossing) bij concentraties boven 2 mg/mL. Ze zijn sterk emissief en fluoresceren uitsluitend wanneer ze aan hun doelwit binden. Ze zijn gevalideerd met exosomen afkomstig van MSC-, PC3-, HT29- en A549-cellijnen.
Gram-typering van bacteriën
Acoerela biedt kleurstoffen die Gram-typering mogelijk maken in bacteriële mengsels, zonder antimicrobiële effecten. Bacteriën worden doorgaans geclassificeerd als Gram-positief of Gram-negatief op basis van hun membraanstructuur. Gram-negatieve bacteriën beschikken over een buitenmembraan dat rijk is aan sterk geladen lipopolysacchariden (LPS), een kenmerk dat ontbreekt bij Gram-positieve soorten.
De Gram-selectieve Acoerela-kleurstof maakt gebruik van deze structurele verschillen en labelt specifiek Gram-positieve bacteriën dankzij de snellere binnendringing van de kleurstof in deze cellen. De selectiviteit werd bevestigd in gemengde populaties met Gram-positieve soorten (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis) en Gram-negatieve soorten (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli).
Membraankleurstoffen voor zoogdiercellen: niet-cytotoxische kleurstoffen voor het volgen van celdeling over meerdere generaties
Het monitoren van celdeling is cruciaal in celbiologisch onderzoek naar immuunregulatie, celfunctie, quiescentie, proliferatie en differentiatie. Fluorescente trackers voor celdeling worden veel gebruikt in flowcytometrie en imaging om celinteracties en cellot in vitro en in vivo te bestuderen.
Acoerela-membraankleurstoffen maken een betrouwbaar volgen van celdeling mogelijk dankzij hun stabiele membraanbinding en lage cytotoxiciteit. Door hun hoge kwantumefficiëntie kunnen cellen langdurig fluorescent gevolgd worden over meerdere generaties.
NR-II tumormarkeringskleurstof: near-infrarood II-probe voor het in vivo volgen van tumorgroei
Near-infrared II (NIR-II)-kleurstoffen winnen aan belangstelling dankzij hun diepe weefselpenetratie, lage autofluorescentie en minimale achtergrondsignalen in dit deel van het elektromagnetisch spectrum.
De Acoerela NIR-II-kleurstof maakt langdurige monitoring van tumorgroei in muismodellen mogelijk, zonder significante verlies van fluorescentie. De langdurige emissie en het hoge kwantumrendement stellen onderzoekers in staat tumorprogressie en respons op anticancerbehandelingen in vivo te bestuderen. Deze aanpak kan het aantal proefdieren verminderen dat traditioneel op vaste tijdstippen wordt geofferd voor tumorkarakterisatie.
Kleurstoffen voor extracellulaire vesikels
Belangrijkste kenmerken
- Wateroplosbaar (>2 mg/mL)
- Stabiele labeling (>24 uur)
- Geen kleurstofoverdracht tussen vesikels
- Korte incubatietijd (~30–60 min)
- Diverse kleuropties beschikbaar
Flowcytometrische analyse van met Acoerela Extracellular Vesicle Dye gelabelde exosomen
Dotplot met:
(a) ongelabelde exosomen,
(b) exosomen gelabeld met 1 µM Acoerela Exosome Dye,
(c) 1 µM Acoerela Exosome Dye alleen, en
(e) 1 µM commercieel verkrijgbare PKH26-kleurstof alleen, dus zonder aanwezigheid van exosomen.
Imaging-flowcytometrie
PC3-exosomen werden gelabeld met Acoerela Extracellular Vesicle Dye en gezuiverd met een Amicon 100 kDa-filter voordat ze aan A549-cellen werden toegevoegd, geïncubeerd en geanalyseerd op het ImageStream-systeem (Amnis) na (a) 2 uur, (b) 4 uur en (c) 8 uur incubatie.
Met Acoerela gekleurde exosomen werden waargenomen als groene fluorescentiepuntjes.
In afwezigheid van exosomen werd geen cellulaire fluorescentie gedetecteerd omdat alle vrije kleurstof tijdens de zuivering was verwijderd (d).
Daarentegen werden DiD-micellen niet verwijderd, waardoor er nog steeds fluorescentie in de cellen zichtbaar was. Dit signaal duidt op opname van kleurstofaggregaten, die verkeerd kunnen worden geïnterpreteerd als met DiD gelabelde exosomen.
Gram-selectieve kleurstoffen voor bacteriën
>GO TOP
Belangrijkste kenmerken
- Sterke emissie
- Geen antimicrobieel effect op bacteriële cellen
- Geschikt voor planktonische culturen en biofilms
- Overtollige kleurstof is gemakkelijk af te wassen
De Gram-selectieve Acoerela-kleurstof maakt gebruik van structurele verschillen tussen Gram-positieve en Gram-negatieve celwanden. Omdat de kleurstof sneller binnendringt in Gram-positieve bacteriën, kunnen deze selectief worden gelabeld. De selectiviteit werd bevestigd in gemengde culturen met Gram-positieve bacteriën (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis) en Gram-negatieve bacteriën (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli).
In situ Gram-typering van een gemengd microbieel biofilm werd uitgevoerd met de Acoerela-kleurstof in combinatie met een tegenkleuring. Confocale microscopiebeelden tonen E. faecalis (Gram-positief, kokvormig) en E. coli (Gram-negatief, staafvormig) in een polymicrobieel biofilm na sequentiële kleuring met een Gram-positieve selectieve kleurstof en een Gram-negatieve tegenkleuring.
(A) Samengevoegde beelden van beide kanalen:
(b) Acoerela Gram-Selective Dye-kanaal (Ex405/Em450–490) en
(c) FM 4-64-kanaal (Ex639/Em640–700).
Membraankleurstoffen voor zoogdiercellen
Het monitoren van celdeling is cruciaal in celbiologisch onderzoek naar immuunregulatie, celfunctie, quiescentie, proliferatie en differentiatie. Fluorescente celdelingstrackers worden veel gebruikt in flowcytometrie en imaging om celinteracties en cellot zowel in vitro als in vivo te bestuderen.
Acoerela-membraankleurstoffen maken nauwkeurige opvolging van celdeling mogelijk dankzij hun stabiele membraanbinding en lage cytotoxiciteit. Door hun zeer hoge kwantumefficiëntie kunnen cellen langdurig fluorescerend gevolgd worden over meerdere generaties.
Belangrijkste kenmerken
- Hoog kwantumrendement (>25 %)
- Stabiele binding aan membranen van zoogdiercellen
- Lage fotobleaching
- Lage cytotoxiciteit
- Geschikt voor celdelingstracking en labeling van rode bloedcellen
- Diverse kleuropties beschikbaar
Acoerela-membraankleurstof
Confocale beelden van HepG2-cellen die dubbel gelabeld werden met de Acoerela Membrane Labeling Dye en een commercieel verkrijgbare membraankleurstof (FM 4-64).
(a) Acoerela-kanaal (Ex405),
(b) FM 4-64-kanaal (Ex488),
(c) brightfield-kanaal,
(d) gecombineerd kanaal.
De co-localisatie van de Acoerela-kleurstof met FM 4-64 bevestigt de membraanspecificiteit van de Acoerela-kleurstof.
Acoerela-celdelingstracking
A549-tumorcellen van zoogdieren werden gelabeld met de Acoerela Cell Division Tracking Dye. Gelabelde cellen (rood) vertoonden een toename van 3 log in fluorescentie-intensiteit vergeleken met ongelabelde cellen (zwart). De fluorescentie bleef behouden over vier opeenvolgende passages voor analyse op de CytoFLEX (Beckman Coulter).
Oranje: 1e passage, Groen: 2e passage, Blauw: 3e passage, Magenta: 4e passage.
Labeling van rode bloedcellen
Flowcytometrie werd uitgevoerd op stalen met mengsels van ongelabelde rode bloedcellen (RBC’s) en RBC’s gelabeld met de Acoerela-kleurstof, in de verhoudingen: (a) 0:5, (b) 2:3, (c) 3:2 en (d) 5:0. De Acoerela-kleurstof blijft na labeling stabiel in de cellen en wordt niet overgedragen naar ongelabelde cellen, wat zorgt voor een duidelijke en contaminatievrije scheiding van de celpopulaties.
NIR-II Acoerela Kleurstof > NAAR BOVEN
Near-infrarood II (NIR-II)-kleurstoffen winnen de laatste jaren aan belangstelling dankzij hun diepe weefselpenetratie en de lage autofluorescentie en achtergrondsignalen in dit deel van het elektromagnetisch spectrum.
De Acoerela NIR-II-kleurstof maakt langdurige monitoring van tumorgroei in muismodellen mogelijk, zonder aanzienlijk verlies van emissie. Door de langdurige fluorescentie en het hoge kwantumrendement kunnen onderzoekers tumorprogressie en de effecten van anticancerbehandelingen in vivo bestuderen. Deze aanpak kan het aantal proefdieren verminderen dat traditioneel op vaste tijdstippen wordt geofferd voor tumorkarakterisatie.
Acoerela-membraankleurstof
- Sterke NIR-II-fluorescentie (Ex859/Em1017)
- Geschikt voor in vivo beeldvorming
- Langdurig signaal (>14 dagen)
- Lage cytotoxiciteit
- Hoge wateroplosbaarheid
In vivo-beeldvorming
(Boven) In vivo fluorescentiebeelden van een intracraniale tumor over 14 dagen en (onder) van een subcutane tumor over 26 dagen, verkregen via de emissie van de NIR-II Acoerela-kleurstof. In beide tumoren nam de fluorescentie-intensiteit toe naarmate de tumor groeide, wat een niet-invasieve methode biedt om tumorgroei te volgen zonder herhaaldelijk muizen te hoeven opofferen.
AcoRL-referentieliposomes
AcoRL-referentieliposomes zijn vooraf gelabelde fluorescente liposomen, samengesteld uit biologisch relevante synthetische lipiden en 1 mol% Aco-Dyes (ten opzichte van het totale lipidengehalte). Ze dienen als betrouwbare standaarden voor instrumentoptimalisatie en fluorescence-gebaseerde analyses.
Beschikbaar als zowel positieve als negatieve controle hebben AcoRL-liposomen een gemiddelde deeltjesgrootte van 50–100 nm. Ze maken een nauwkeurige visualisatie en analyse mogelijk van met Aco-Dye gelabelde stalen via flowcytometrie of andere fluorescentieplatformen.
VRAAG EEN OFFERTE : ANALIS - NAMUR 081 25 50 50 - GENT 092437710 - WWW.ANALIS.COM/ACOERELA - MAIL@ANALIS.BE
Beschikbare productopties:
Acoerela-fluorescentiekleurstoffen en referentieliposomes