Le succès de l'utilisation de vecteurs viraux pour introduire une charge moléculaire dans une cellule ou remplacer des gènes défectueux par des gènes fonctionnels est un point d'inflexion dans l'avenir de la médecine moderne.
La production de vecteurs est un flux de travail complet comprenant :
- Conception de vecteurs, expansion cellulaire, transfection / infection, lyse cellulaire, récolte / clarification, concentration, capture, polissage, formulation, filtration stérile.
- La plupart du temps, le vecteur est un virus (AAV, lentivirus, ..), un plasmide, mais il peut aussi s'agir d'une vésicule extracellulaire ou d'une nanoparticule comme les LNP.
Vos défis en matière de production de vecteurs
- Manipulation de virus ou d'agents pathogènes dans des conditions sûres?
- Votre méthode de caractérisation de la charge de la capside est-elle robuste, fiable et validée ?
- Comment peut-on augmenter la pureté du vecteur ?
- Votre méthode de comptage cellulaire et d'analyse de viabilité est-elle facile et fiable ?
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- Préparatoire Ultracentrifugeuse, Ultracentrifugeuse analytique (AUC)
- Charge de capside de vecteur viral par Ultracentrifugation analytique (AUC) ou par Electrophorèse capillaire (EC)
- Taille, forme et structure des vecteurs viraux par analyse Ultracentrifugation analytique (AUC) , par Electrophorèse capillaire (EC) ou par Diffraction laser (DL)
- Stérilisation à la vapeur
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Bain marie
Pour un rapide récapitulatif, la thérapie génique implique généralement l'insertion de matériel génétique dans des cellules via un vecteur viral inoffensif qui « infecte » la cellule et délivre la charge génétique. Des méthodes analytiques sont nécessaires pour les tests de matières premières, le contrôle en cours de processus et pour démontrer la qualité du lot de vecteurs viraux. Les lots de vecteurs viraux conformes aux BPF qui sont fabriqués pour des essais cliniques doivent respecter un nombre croissant de réglementations mondiales. La sécurité, l'identité, la force, la pureté et la qualité figurent parmi les éléments qui doivent être démontrés.
Un des vecteurs les plus populaires pour l'emballage est le virus adéno-associé (AAV), qui présente deux avantages clés : l'efficacité en tant que vecteur de livraison de gènes et une faible pathogénicité. Le virus a été modifié par rapport au type sauvage pour optimiser son efficacité en tant que vecteur de gènes thérapeutiques et minimiser son potentiel à causer des maladies. L'AAV recombinant est la plateforme leader pour la thérapie génique aujourd'hui.
Créer des produits sûrs qui peuvent être augmentés – et conserver leur sécurité – est essentiel. L'élément important dans la fabrication de produits de thérapie génique est la pureté, qui fait référence à l'efficacité de l'« emballage » pour la livraison dans la cellule. Un mauvais emballage peut conduire à une thérapie moins efficace. Et administrer des doses plus élevées de thérapie pour compenser un mauvais emballage risque de déclencher une réaction allergique chez le patient. La FDA a émis
un guide
pour des essais cliniques qui abordent l'importance de cette question très précise.
Tous les principes développés ci-dessus sont bien sûr utilisés dans de nombreux autres produits médicaux de thérapie avancée (ATMP) que les immunothérapies. Il est également important de souligner qu'à la suite de la période COVID-19, les nanoparticules lipidiques (LNP) sont un vecteur plus courant pour le matériel génétique comme l'ARNm.
Développement & Production de vecteurs viraux:
Progrès dans les processus et la traduction pour la thérapie génique humaine
Comprendre le rôle des vecteurs viraux dans la recherche génétique moderne et comment l'ultracentrifugation est utilisée pour produire ces systèmes d'administration clés.
Christine Le Bec - Méthodes analytiques pour mesurer les particules AAV vides & pleines
Examen des techniques de caractérisation biophysique et de l'utilisation de l'ultracentrifugation analytique (AUC) pour mesurer les particules AAV vides et pleines.
CRISPR pour l'immunothérapie : Introduction & Vue d'ensemble
Vidéo sur l'introduction de CRISPR pour l'immunothérapie.
Sources et références:
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