Het succes van het gebruik van virale vectoren om een moleculaire lading in een cel te brengen of defecte genen te vervangen door functionele, is een keerpunt in de toekomst van de moderne geneeskunde.
Vectorproductie is een volledige workflow, inclusief :
- Vectorontwerp, celexpansie, transfectie/infectie, cellyse, oogst/opheldering, concentratie, vangst, polijsten, formulering, steriele filtratie.
- Meestal is de vector een virus (AAV, Lentivirus, ...), een plasmide, maar het kan ook een extracellulair vesikel zijn.
Uw uitdagingen in vectorproductie
- Virus of ziekteverwekker manipuleren in veilige omstandigheden?
- Is uw Capsid Load karakterisatie methode robuust, betrouwbaar en gevalideerd?
- Hoe kan dezuiverheid van de vector worden verhoogd?
- Is jouw analyse methode voor celtelling en levensvatbaarheid eenvoudig en betrouwbaar?
Vraag het onze experts
Onze oplossingen voor uw vector workflow
- Luchtbemonstering voor levensvatbare deeltjesbewaking in cleanrooms
- Geautomatiseerde vloeistofverwerking Geautomatiseerde contactloze vloeistofbehandeling
- Biomassa door spectrofotometrie
- Bioreactor
- Bioreactor geautomatiseerde celteller & levensvatbaarheidsanalysatoren
- Bioreactor media gezondheid bioanalyzer
- Bioveiligheidskast
- Capillaire elektroforese (CE) voor plasmidezuiverheid, analyse van virale eiwitten, kwantificering van lege/volledige capsiden, integriteit van genoom
- Oogsten van cellen
- CentrifugesCentrifuge Biosafe labwares en accessoires
- CO2-incubator, Schudbroedstoof
- Desinfectie
- Elisa Handmatige methoden met microplaatlezer en microplaatwasmachine
- Elisa geautomatiseerde oplossingen, 10 dingen om te overwegen voor ELISA automatisering
- Stroomcytometer
- Koelkasten, vriezers en diepvriezers +4°C tot -80°C Vloeibare N2
- Cryogene conservering
- Beeldvorming voor Western blot
- Broedstoofschudder
- PCR-instelling, PCR-kast
- Pipet
- Voorbereidend Ultracentrifuge, Analytische Ultracentrifuge (AUC)
- Virale Vector Capside Belasting door Analytische Ultracentrifugatie (AUC) of door Capillaire elektroforese (CE)
- Virale vectoromvang, -vorm en -structuur door Analytische
- Ultracentrifugatie (AUC)door Capillaire elektroforese (CE) of door laserdiffractie (LS)
- Stoomsterilisatie
-
Waterbad
Bijgentherapie wordtgenetisch materiaal in cellen ingebracht via een onschadelijke virale vector ;die de cel "infecteert" en de genetische lading levert. Analysemethoden zijn nodig voor het testen van grondstoffen, procescontrole en om de kwaliteit van de virale vectorcharge aan te tonen. GMP Virale Vector batches die geproduceerd worden voor klinisch onderzoek moeten voldoen aan een toenemend aantal wereldwijde voorschriften. Veiligheid, identiteit, sterkte, zuiverheid en kwaliteit behoren tot de items die aangetoond moeten worden.
Een van de populairste vectoren voor verpakking is het adeno-geassocieerd virus (AAV), dat twee belangrijke voordelen heeft: efficiëntie als een vector voor genafgifte en lage pathogeniteit. Het virus is gemodificeerd ten opzichte van het wilde type om zijn efficiëntie als therapeutische gendrager te optimaliseren en zijn potentieel om ziekten te veroorzaken te minimaliseren. Recombinant AAV is vandaag de dag het toonaangevende platform voor gentherapie.
Het creëren van veilige producten die kunnen worden opgeschaald - en hun veiligheid behouden - is essentieel. Het belangrijkste element bij de productie van gentherapieproducten is zuiverheid, wat verwijst naar de efficiëntie van de "verpakking" voor levering in de cel. Een slechte verpakking kan leiden tot een minder effectieve therapie. En het geven van hogere doses therapie om een slechte verpakking te compenseren kan een allergische reactie bij de patiënt veroorzaken. De FDA heeft begeleiding voor klinische studies die het belang van deze kwestie behandelt.
Alle hierboven ontwikkelde principes worden natuurlijk gebruikt in vele andere geneesmiddelen voor geavanceerde therapie (ATMPs) dan immuuntherapieën. Het is ook belangrijk om te benadrukken dat na de COVID19 periode, de lipide nanodeeltjes(LNP's) een meer gebruikelijke drager zijn voor genetisch materiaal zoals mRNA.
Ontwikkeling & Productie van Virale Vectoren:
Vooruitgang in processen en vertaling voor humane gentherapie
Begrijp de rol die virale vectoren spelen in modern genonderzoek en hoe ultracentrifugatie wordt gebruikt om deze belangrijke afgiftesystemen te produceren.
Christine Le Bec - Analysemethoden om lege & volle AAV-deeltjes te meten
Bespreking van biofysische karakteriseringstechnieken en een focus op het gebruik van analytische ultracentrifugatie (AUC) voor het meten van lege en volle AAV-deeltjes.
CRISPR voor immunotherapie: Inleiding & Overzicht
Uitgelichte video over de introductie van CRISPR voor immuuntherapie.
Bronnen en referenties:
Hacein-Bey-Abina, S., Hauer, J., Lim, A., Picard, C., Wang, G. P., Berry, C. C., Martinache, C., Rieux-Laucat, F., Latour, S., Belohradsky, B. H., Leiva, L., Sorensen, R., Debré, M., Casanova, J. L., Blanche, S., Durandy, A., Bushman, F. D., Fischer, A., & Cavazzana-Calvo, M. (2010). Werkzaamheid van gentherapie voor X-gebonden ernstige gecombineerde immunodeficiëntie. The New England journal of medicine, 363(4), 355-364.
https://doi.org/10.1056/NEJMoa1000164
Kaeppel, C., Beattie, S. G., Fronza, R., van Logtenstein, R., Salmon, F., Schmidt, S., Wolf, S., Nowrouzi, A., Glimm, H., von Kalle, C., Petry, H., Gaudet, D., & Schmidt, M. (2013). Een grotendeels willekeurig AAV-integratieprofiel na LPLD-gentherapie. Nature medicine, 19(7), 889-891.
https://doi.org/10.1038/nm.3230
Masat, E., Pavani, G., & Mingozzi, F. (2013). Humorale immuniteit tegen AAV vectoren in gentherapie: uitdagingen en mogelijke oplossingen. Discovery geneeskunde, 15(85), 379-389.
Mingozzi, F., & Hoog, K. A. (2013). Immuunresponsen op AAV vectoren: het overwinnen van barrières voor succesvolle gentherapie. Bloed, 122(1), 23-36.
https://doi.org/10.1182/blood-2013-01-306647
Joshi, P., Cervera, L., Ahmed, I., Kondratov, O., Zolotukhin, S., Schrag, J., Chahal, P. S., & Kamen, A. A. (2019). Achieving High-Yield Production of Functional AAV5 Gene Delivery Vectors via Fedbatch in an Insect Cell-One Baculovirus System. Molecular therapy. Methoden & klinische ontwikkeling, 13, 279-289.
https://doi.org/10.1016/j.omtm.2019.02.003